P5’末端TチミンT3’APCPPGCAGPPP78◆◆◆9TCCATGATGAACTCGTGACCA東京都医学検査 Vol. 53 No. 2～～～～目目的的遺遺伝伝子子領領域域解解離離温温度度をを決決めめるる要要因因•塩塩基基（（AA、、GG、、TT、、CC））ののババラランンスス•長長ささ•塩塩濃濃度度ななどど目的遺伝子領域の有/無の確認目的領域の長さの確認シークエンシング前の目的領域増幅✔プライマーの長さは20-30塩基長✔増幅させたい遺伝子を挟み込むため2種類必要（下図プライマーA,B）•検体DNA•プライマーセット•基質：dNTP（デオキシヌクレオチド三リン酸）（dATP / dGTP / dCTP / dTTP）•酵素：耐熱性TaqDNAポリメラーゼ•補因子：塩化マグネシウム（Mg2+）•緩衝液：Tris-HClベース緩衝液などDNA鎖は温度により、何度でも変性（一本鎖への解離）と会合（二本鎖形成）する会合冷却二本鎖DNAの50%が一本鎖に変性する温度を『Tm値』と呼ぶPolymerase Chain Reaction （ポリメラーゼ連鎖反応）の略遺伝子検査したい特定のDNA配列を狙って増幅する目的配列DNA鎖増幅する目的遺伝子領域の始まりと終わりの位置を決める役割目的遺伝子を挟み込むように結合する1本鎖DNA断片プライマーAある決まった配列が出来る確率は？20塩基長の場合4x4x4x4・・・・・x4=420検体DNA検出したい遺伝子・鋳型90℃以上の高温二本鎖二本鎖形成時5’末端塩基ペア(相補性)グアニン5’→3’の方向性OHアデニン3’末端OHデオキシヌクレオチド三リン酸（dNTP）•温度設定•サイクル数サーマルサイクラー（温度制御ブロック）プライマーを起点に、検体DNAを鋳型として二本鎖DNA を合成Aの相手はT耐熱性Taq DNAポリメラーゼ101214OH遺伝子の基礎PPCCRRのの基基礎礎リアルタイムPCRの基礎リアルタイムPCRを利用した遺伝子関連検査技術リアルタイムPCRの設計フローデジタルPCRとはAGCDNA= Deoxyribo Nucleic Acid3’末端シトシンOHPリン酸基デオキシリボースDeoxyribose水素結合11dNTPs13変性温温度度加熱PCRプライマーB1,100,000,000,000 約1兆分の1！一本鎖に変性DDNNAAのの性性質質DNA鎖の変性と会合PPCCRRととはは？？DNA配列を増幅する技術PPCCRRのの原原理理プライマーとはPPCCRRののスステテッッププステップ1（熱）変性DDNNAAのの性性質質相補性と方向性PPTable of contentsPPCCRRのの原原理理PCRの基本条件PPCCRRのの原原理理DNAポリメラーゼとは5’プライマーAGT5’G3’239
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